ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),用于檢測(cè)和定量樣本中抗原或抗體的存在。其基本原理可以概括為以下幾個(gè)步驟:
包被抗原/抗體:在ELISA板的孔中涂敷已知的抗體(用于檢測(cè)抗原)或抗原(用于檢測(cè)抗體),并通過孵育使其結(jié)合到固相基質(zhì)上。
樣本添加:將待測(cè)樣本(如血清、血漿或其他生物樣本)加入孔中。樣本中的目標(biāo)抗原或抗體會(huì)與已包被的抗體或抗原結(jié)合。
洗滌:通過洗滌步驟去除未結(jié)合的成分,減少背景噪聲。
添加酶標(biāo)記的二抗:加入一種與目標(biāo)抗原或抗體特異性結(jié)合的酶標(biāo)記的二抗。這種二抗會(huì)與樣本中結(jié)合的抗原或抗體結(jié)合。
再次洗滌:去除未結(jié)合的二抗。
底物反應(yīng):向孔中添加底物,底物與酶反應(yīng)生成可測(cè)量的信號(hào)(通常是顏色變化)。信號(hào)的強(qiáng)度與樣本中目標(biāo)物的濃度成正比。
結(jié)果測(cè)定:使用分光光度計(jì)等儀器測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度,從而定量分析樣本中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
ELISA技術(shù)因其靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于臨床診斷、食品安全檢測(cè)、疫苗研發(fā)等領(lǐng)域。
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