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浙江大學的邱老師通過介紹聯(lián)系了我們購買HMC-1人肥大細胞，經過了一周左右的時間順利發(fā)貨，

杭州市余杭區(qū)文一西路的邱老師對我們的細胞狀態(tài)非常滿意，表示會向別的老師介紹，在這里非常感謝邱老師，HMC-1的培養(yǎng)說明如下：

一、細胞培養(yǎng)條件

英文名稱:Hmc-1

中文名稱:人肥大細胞

生長特性:圓形、懸浮

凍存條件:無血清凍存液

培養(yǎng)體系:IMDM+10%FBS

傳代方法:1:2-1:3,第一次建議1:2傳代 

傳代情況:2~3天換液/傳代

備注:用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)

HMC-1人肥大細胞細胞收到后處理

 收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行售后的依據(jù)。

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

HMC-1人肥大細胞細胞培養(yǎng)步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

3）細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。

HMC-1人肥大細胞